简介

　　环状RNA（circRNA）是一类特殊的非编码RNA分子，也是RNA领域最新的研究热点。环状RNA是mRNA在剪接的过程中，上游exon的5’端与下游exon的3’端剪接到一起，从而形成的首尾相接的环状RNA分子，大量存在于真核转录组中，在不同的物种中具有保守性，同时存在组织及不同发育阶段的表达特异性。目前已经发现的环状RNA已多达十万种。

　　环状RNA（circRNA）的Real time PCR检测常用于验证circRNA 测序和circRNA芯片的差异结果。

一、技术原理

     circRNA定量验证手段与常规PCR手段不同，常规手段是围绕目的片段的上下游分别设计PCR引物，称之为convergent primer，需扩增的片段位于上下游引物之间。而对于circRNA，尤其外显子环化circRNA，除backsplice junction位点处不同于linear RNA之外，body区与linearRNA是一致的。因此，验证时需要特异性针对backsplice junction位点处设计primer，称之为divergent primer，而且设计的PCR 产物的长度越短越好，可以增强环化位点处扩增效率。如下图：

　　为增强circRNA的验证效率，起始模版需满足以下要求（3 free）：1. DNA free；2. rRNA free；3. linearRNA free。

　　验证策略：对3free RNA以及genome DNA同时进行PCR扩增，电泳检测PCR产物大小。

　　二、服务内容

      （1）引物设计及引物合成；

      （2）RNA抽提；

      （3）进行逆转录；

      （4）荧光定量PCR检测各个样品circRNA的表达量。

客户提供

      （1）circRNA的名称或者登录号；

      （2）总RNA≥8ug），或提供满足提取8ug以上RNA的组织、细胞、血液等样品。

我们提供

     （1）引物序列；

     （2）完整的实验报告（扩增曲线、溶解曲线、实验步骤）；

     （3）结果分析报告。




三、结果展示

1、PCR产物检测（对3free RNA及genome DNA同时进行PCR扩增）







2、扩增曲线

         

3、溶解曲线



4、分析结果